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Histopaque-1119

品牌：Sigma/西格瑪點擊下載說明書

儲存：2-8度，避光，不可冷凍

產品描述
Histopaque -1119 是一種無菌的，內毒素測試的多蔗糖和泛影酸鈉溶液，調整到1.119 g/mL 的密度。這種現成的溶液，當與Histopaque-1077 聯合使用時，可離心分離小體積全血中活的單個核細胞和粒細胞。Histopaque-1119 和Histopaque-1077 采用了已發表的一步法的方案¹。

溶液成分
Histopaque-1119 是60 g/L 的多蔗糖/polysucrose和167 g/L 的泛影酸鈉的無菌溶液。

參數
密度:1.118-1.120 g/mL
內毒素/Endotoxin:≤3 EU/mL
pH 值:8.8-9.0
所需試劑和設備（本產品不包含）

1. Histopaque-1077， 產品編號10771
2. 離心機(水平轉子)能夠產生700 × g
3. 離心管， 15 mL 塑料， 錐形底
4. 等滲PBS/磷酸鹽緩沖鹽水溶液或適當的細胞培養基

注意事項和免責聲明
僅供研發使用。不可用于藥品、家用或其他用途。有關危險和安全操作方法的信息，請參閱安全數據表。
準備
標本采集-采集無防腐劑抗凝血(EDTA 或肝素)或使用去纖維血。為達到最佳效果，血液應在采集后2 小時內處理完畢。
存儲
儲存在2-8°C 避光。Histopaque-1119 的有效期為3 年。試劑標簽上有有效期。

操作步驟
雙梯度由等量的Histopaque-1077 在Histopaque-1119 上分層形成。抗凝全血小心地鋪到上部的Histopaque-1077 溶液上。在離心過程中，紅細胞被多聚糖聚集并迅速沉淀。在Histopaque-1077/1119 界面下部發現了粒細胞;而淋巴細胞和其他單個核細胞則出現在血漿/Histopaque-1077 界面的上部。紅細胞污染可以忽略不計。在上界面發現的大多數血小板在洗滌步驟中通過低速離心除去。
1.向15 mL 錐形離心管中加入3 mL Histopaque-1119。
2.小心地在Histopaque-1119 上分層加入3ml Histopaque-1077，并置于室溫。
3.小心地將6 毫升全血分層到步驟2 中的試管上部梯度上。
4.700 × g 室溫離心30 分鐘。在較低的溫度下離心，如4℃，可能會導致細胞結塊，回收率較差。
注意:確保離心機上的剎車和加速調到最低檔，剎車和加速太猛可能會影響層分離。
5.小心取出離心管。應該觀察到兩個不同的不透明層。
6.抽吸并丟棄血漿至距上層0.5 厘米以內。將細胞從這一層轉移到標有“單核”的試管中。
7.抽吸并排出剩余液體至下層0.5 厘米處。將這一層的細胞轉移到標記為“粒細胞” 的試管中。

8.向試管中加入10ml 等滲PBS/磷酸鹽緩沖鹽水，清洗細胞。200 × g 離心10 分鐘，取上清棄用。
9.用巴斯德移液管輕輕地吸進吸出，使細胞重新懸浮。
10.重復步驟8 和9 兩次。
11.將細胞重懸于適當體積的等滲PBS/磷酸鹽緩沖鹽水溶液或適當的細胞培養基中。

此時可以用以進行后續的各種化驗。具體步驟的選擇取決于個人。
結果
紅細胞應沉降至離心管底部。
粒細胞應在Histopaque-1119 和Histopaque-1077的界面上形成條帶。
單個核細胞應在Histopaque-1077 和血漿的界面處形成條帶。
如果觀察結果與預期結果不同，請聯系技術支持尋求幫助。
參考文獻
1. English, D., and Andersen, B.R., Single-step separation of red blood cells. Granulocytes and mononuclear leukocytes on discontinuous density gradient of Ficoll-Hypaque. J. Immunol. Methods, 5, 249 (1974).
Histopaque 是Sigma-Aldrich Co. LLC 的注冊商標。
Ficoll 是cytiva/思拓凡（原GE Healthcare） 的注冊商標。

備注：Mf, mam, VNC 04/20-1