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密度梯度分離 > 即用型分離液

人  淋巴細(xì)胞  骨髓  臍帶血  外周血  

Histopaque-1077

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儲(chǔ)存：2-8度

貨號(hào)規(guī)格價(jià)格貨期
10771-100ML100mL592.52  444現(xiàn)貨
10771-500ML500mL2103.42  18513天左右
10771-6X100ML6x100mL2515.98  2214現(xiàn)貨

詳細(xì)說明

Histopaque-1077已用于

  1. 外周血單核細(xì)胞（PBMC）以及骨髓單核細(xì)胞（BMMC）的分離
  2. 通過離心進(jìn)行單核細(xì)胞的純化
  3. 人類淋巴細(xì)胞的分離
  4. 從全血中進(jìn)行乳腺癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）的分離

產(chǎn)品描述
Histopaque-1077 是一種無菌、經(jīng)內(nèi)毒素檢測(cè)的聚蔗糖及泛影鈉溶液，并調(diào)整密度至1.077g/mL。 這種即用型溶液可以從小體積的全血中分離得到活性淋巴細(xì)胞和其他單個(gè)核細(xì)胞。Histopaque-1077適用于人淋巴細(xì)胞抗原 (HLA) 分型1，可作為獲得T、B 和其它淋巴細(xì)胞2之前的初始分離步驟，也可用來制備用于細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞毒性試驗(yàn)的淋巴細(xì)胞懸液3.

溶液成分

聚蔗糖/Polysucrose，57 g/L，和鈉泛影酸鹽/sodium diatrizoate，90 g/L。

參數(shù)指標(biāo)

溶液密度：1.076-1.078 g/ml

內(nèi)毒素/Endotoxin： <0.3 EU/mL

pH值： 8.8-9.0

注意事項(xiàng)和免責(zé)聲明
僅供研發(fā)使用。 不適用于藥物、家用、或其他用途。 請(qǐng)查閱安全數(shù)據(jù)有關(guān)危害和信息的表進(jìn)行使用操作。
儲(chǔ)存/穩(wěn)定性
將產(chǎn)品儲(chǔ)存在 2–8 °C。Histopaque-1077 的有效期為3年。 試劑標(biāo)簽標(biāo)明有效期。

準(zhǔn)備說明
標(biāo)本采集 - 采集血液不含防腐劑的抗凝劑（EDTA 或肝素）或使用去纖維蛋白的血液。 為了最好結(jié)果，血液應(yīng)在采集后的2小時(shí)內(nèi)。
操作過程

抗凝血鋪在Histopaque-1077上面。 在離心過程中，紅細(xì)胞被聚蔗糖聚集并迅速沉淀。 粒細(xì)胞變成輕微的高滲，這會(huì)增加他們的沉降速率，導(dǎo)致沉積到離心管底部。淋巴細(xì)胞和其他單核細(xì)胞留在Histopaque-1077界面。紅細(xì)胞污染是微不足道。 包含的大多數(shù)血小板可通過后面的洗滌步驟低速離心去除。

  1. 向 15 mL 錐形離心管中加入3 毫升的 Histopaque-1077 并恢復(fù)到室內(nèi)溫度。
  2. 小心地將 3 mL 全血鋪在Histopaque-1077上面。
  3. 400×g 離心在室溫下 30 分鐘。在較低溫度下離心，例如 4 °C，可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)塊并且恢復(fù)不佳。注意：確保剎車和加速在離心機(jī)上處于最低檔，急剎車和加速可能影響分層。
  4. 離心后用巴斯德移液管小心吸出0.5 厘米高度的不透明的單個(gè)核細(xì)胞層。丟棄不透明層上面的那部分上清液。
  5. 用巴斯德吸管小心轉(zhuǎn)移不透明界面到干凈的錐形離心管。
  6. 加入10 mL洗滌細(xì)胞的等滲PBS/磷酸鹽緩沖鹽溶液或適當(dāng)?shù)募?xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)并通過輕輕從巴斯德移液管取出吸入進(jìn)行混合。
  7. 250×g 離心 10 分鐘。
  8. 吸出上清液并棄去。
  9. 用 5 mL 等滲PBS/磷酸鹽緩沖鹽溶液或適當(dāng)?shù)募?xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)重懸細(xì)胞沉淀，并通過輕輕從巴斯德移液管取出吸入進(jìn)行混合。
  10. 250×g 離心 10 分鐘。
  11. 重復(fù)步驟 8、9 和 10，丟棄上清液并重懸細(xì)胞沉淀在 0.5 mL 等滲PBS/磷酸鹽緩沖液中或適當(dāng)?shù)募?xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)中。

結(jié)果
紅細(xì)胞和粒細(xì)胞應(yīng)沉淀至離心管底部。單核細(xì)胞應(yīng)成帶在Histopaque-1077 和血漿的界面處。
如果觀察到的結(jié)果與預(yù)期不同，請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)支持求助。

參考資料/References

1. Amos, D.B., and Pool, P., “HLA typing” in Manual of Clinical Immunology, Rose, N.R., and Friedman, H., eds., American Society for Microbiology, (Washington, DC: 1976) pp. 797-804.

2. Winchester, R.J., and Ross, G., “Methods for enumerating lymphocyte populations” in Manual of Clinical Immunology, Rose, N.R., and Friedman, H., eds., American Society for Microbiology, (Washington, DC: 1976) pp. 64-76.

3. Thorsby, E., and Bratlie, A., “A rapid method for preparation of pure lymphocyte suspensions.” Histocompatibility Testing, Terasaki, P.I., ed., 665-666 (1970).

備注：10771 Product Information Sheet Rev 12/2021