| 貨號 | 規(guī)格 | 價格 | 貨期 |
|---|---|---|---|
| 10771&11191 | 100+100mL | 1498.25 1124 | 現(xiàn)貨 |
密度梯度分離 > 即用型分離液
| 貨號 | 規(guī)格 | 價格 | 貨期 |
|---|---|---|---|
| 10771&11191 | 100+100mL | 1498.25 1124 | 現(xiàn)貨 |
詳細說明
該產(chǎn)品包含： Histopaque-1077 100ML；Histopaque-1119 100ML。
Histopaque-1077和Histopaque-1119 都是主要成分為聚蔗糖和泛影酸鈉、經(jīng)過內(nèi)毒素測試的無菌溶液，Histopaque-1077密度為1.077g/mL，Histopaque-1119 密度為 1.119 g/mL。 這兩種即用型介質(zhì)組合起來，可以用于從少量全血中，通過密度梯度離心同時得到具有活性的單核細胞和粒細胞，此方法是參照后續(xù)所列的參考文獻。
技術(shù)參數(shù)：
1、Histopaque-1077
主要化學成分：聚蔗糖/polysucrose 57 g/L, 泛影酸鈉/sodium diatrizoate 90 g/L
密度/Density: 1.076–1.078 g/mL
內(nèi)毒素/Endotoxin: ≤0.3 EU/mL
pH: 8.8–9.0
2、Histopaque-1119
主要化學成分：聚蔗糖/polysucrose 60 g/L, 泛影酸鈉/sodium diatrizoate 167 g/L
密度/Density: 1.118–1.120 g/mL
內(nèi)毒素/Endotoxin: ≤0.3 EU/mL
pH: 8.8–9.0
分離原理：
由相等體積的Histopaque-1077在Histopaque-1119上面形成兩層梯度。抗凝的全血被小心地鋪在 Histopaque-1077 上面。 在離心過程中，紅細胞被聚蔗糖迅速聚集沉淀。 粒細胞位于Histopaque-1077/1119 界面處； 而淋巴細胞和其他單核細胞位于上部的血液/Histopaque-1077界面處。 紅細胞污染幾乎可以忽略不計。 大多數(shù)血小板可以通過低速離心的洗滌步驟去除。
標本采集：
采集不含防腐劑、抗凝劑（EDTA 或肝素）或使用去纖維蛋白的血液。 為獲得最佳效果，應處理血液2小時內(nèi)。
分離步驟：
1. 將 3 mL Histopaque-1119 添加到 15 ml 離心管。
2. 小心地將 3 mL Histopaque-1077 鋪在Histopaque-1119 上面并恢復到室溫。
3. 小心地將 6 mL 全血鋪在Histopaque-1077的上面。
4. 在室溫下以 700 x g 離心 30 分鐘。 低溫離心，如 4 °C，可能會導致細胞結(jié)塊和不良恢復。
5. 小心取出離心管。 應該可以看到兩層上下分開的不透明細胞層。
6. 將距離上面的不透明層0.5 cm 以上的血漿吸出并丟棄。 將上面不透明層的細胞轉(zhuǎn)移到標有“單核”試管中。
7. 將距離下面的不透明層0.5 cm以上的液體吸出并將其丟棄。 將下面的不透明層細胞轉(zhuǎn)移到標有“粒細胞”的試管中。
8. 加入 10 mL 磷酸鹽緩沖鹽水等滲溶液至裝有細胞的試管中，用于清洗細胞。 離心機200 x g 10 分鐘。 去除上清液并丟棄。
9. 用巴斯德吸管輕輕抽吸重懸細胞。
10. 重復步驟 8 和 9 兩次。
11. 將細胞重懸于適當體積的等滲磷酸鹽緩沖鹽水溶液或合適的細胞培養(yǎng)基中。
參考資料：
English, D., and Andersen, B.R., Single-step separation of red blood cells. Granulocytes and mononuclear leukocytes on discontinuous density gradient of ficoll-hypaque. J. Immunol. Methods, 5, 249 (1974). DOI: 10.1016/0022-1759(74)90109-4
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