OptiPrepTM
The optimum density gradient medium/最佳密度梯度介質
OptiPrep 是一種無菌且經過內毒素測試的 60%iodixanol(碘克沙醇，碘二醇，碘乙醇)水溶液，密度為 1.320 g/ml。 碘克沙醇是作為 X 射線造影劑開發(fā)的，因此經過了嚴格的臨床測試。 它是非離子的，對細胞無毒且代謝惰性。 碘克沙醇溶液可以在所有有用的密度下制成等滲，這種溶液具有低粘度和滲透壓。
Sigma/默克公司的OptiPrep™ Density Gradient Medium/OptiPrep™密度梯度培養(yǎng)基(貨號D1556，包裝規(guī)格：250ml)，在Sigma網站對應產品頁面靠下的部分可以看到“法律信息 OptiPrep is a trademark of Serumwerk Bernburg AG”)。加拿大Stemcell公司的OptiPrep™(貨號07820，包裝規(guī)格：250ml)，在其產品說明書里面，也可以看到“OptiPrep is a trademark of Serumwerk Bernburg”。
OptiPrep 的高密度有助于通過連續(xù)或不連續(xù)梯度或通過簡單的密度屏障從密集負載區(qū)浮選來分離細胞。
51個用于細胞分離的實驗方案
OptiPrep能提高細胞器的分辨率。 低粘度、等滲梯度可在預先形成的梯度中快速有效地分離主要細胞器。
64個用于分離亞細胞器和膜的實驗方案
OptiPrep 是病毒純化的理想密度梯度介質[1]，使用 OptiPrep梯度純化的病毒顯示出感染性：粒子數比率至少是 CsCl 梯度的 100 倍。
在基因治療中，用作載體的重組腺相關病毒rAAV(recombinant adenoassociated virus)的密度梯度離心純化[2]，幾乎都用的是OptiPrep介質。目前檢索到的，rAAV研究使用OptiPrep的文獻數量已超過了1200篇[3,4]。
38個用于分離病毒的實驗方案
13個用于分離大分子和脂蛋白純化的實驗方案
技術參數：
主要成分：碘克沙醇/Iodixanol 60%（w/v）CAS號：92339-11-2
密度（Density）：1.320 ± 0.001 克/毫升
滲透壓： ~170 mOsm
內毒素： < 1.0 EU/ml
應用：
- 膜運輸和細胞信號分析
- 胞吞作用和胞吐作用分析
- 哺乳動物和非哺乳動物細胞純化；在沒有中性粒細胞污染的情況下，常規(guī)實現非人類淋巴細胞的最大產量
- 哺乳動物和非哺乳動物細胞器純化
- 質膜和域純化
- 膜囊泡和細胞質純化
- 病毒純化
- 血漿脂蛋白純化
- 蛋白質和蛋白質復合物純化
- 質粒DNA純化
- 核糖核蛋白純化
特性：
- 作為 X 射線造影劑開發(fā)，因此經過嚴格的臨床測試。
- 非離子
- 對細胞無毒
- 代謝惰性。
在生物學和物理化學上與 Nycodenz® 非常相似，但有一些主要區(qū)別：
- 在結構上，Nycodenz® 的近似二聚體
- 滲透壓約為相同密度 Nycodenz® 溶液的一半
- 可以在所有密度下制成等滲
- 可以直接添加到細胞或細胞器懸浮液中，而不會改變其滲透壓，促進浮選梯度的純化
- 由于更高的分子量，比 Nycodenz® 更快地形成自生梯度
- 梯度純化的哺乳動物和非哺乳動物細胞的高生存力
- 使用預先形成的或自生成的梯度進行有效的細胞器和膜囊泡分離
- 病毒傳染性至少比 CsCl 梯度高 100 倍
- 比蔗糖或甘油梯度更好地保存蛋白質-蛋白質和蛋白質-核酸復合物
- 在 4 小時內以自生梯度分析血漿脂蛋白
- 內毒素水平不太保證低于 1.0 EU/ml（由鱟變形細胞裂解物 (LAL) 測試確定）；然而，我們的目標是生產內毒素水平低于或等于 0.13 EU/ml 的批次。每批的實際密度和內毒素水平值在提供的分析證書中指定。
- 根據 Ph. Eur 聲稱無菌。
- 制造、包裝和發(fā)布符合：
- 當前歐盟良好生產規(guī)范指南
- Fresenius Kabi AS 質量體系
- Fresenius Kabi AS 制造許可證
注意事項
- Optiprep的保質期為3年。儲存溫度為4度-24度，避光。使用前將瓶子倒轉數次以混合內容物。
- 詳細使用方法請參見說明書或來電咨詢。
參考資料
- OptiPrep™——The ideal density gradient medium for purification and analysis of viruses
- AAV Purification by Iodixanol Gradient Ultracentrifugation/用碘克沙醇密度梯度離心純化AAV病毒
- OptiPrep™ Reference List RV02-1
- OptiPrep™ Reference List RV02-2
使用OptiPrep的典型文獻
- AAV病毒純化
- Zolotukhin, S., Byrne, B., Mason, E. et al. Recombinant adeno-associated virus purification using novel methods improves infectious titer and yield. Gene Ther 6, 973–985 (1999). https://doi.org/10.1038/sj.gt.3300938
- 肝星狀細胞分離
- Mederacke, I., Dapito, D. H., Affo, S., Uchinami, H. and Schwabe, R. F. (2015). High-yield and high-purity isolation of hepatic stellate cells from normal and fibrotic mouse livers. Nat Protoc 10(2): 305-315.
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